SILAC同位素标记—质谱的蛋白质组定量
发布时间: 2023-03-01 12:57:34
SILAC (stable isotope labeling with amino acids in cell culture)技术即细胞培养条件下稳定同位素标记技术，是在细胞培养时，分别采用含有轻、中、重同位素型必需氨基酸的培养基进行细胞培养（常用稳定同位素氨基酸Lys和Arg）。细胞传代培养过程中，同位素氨基酸将被细胞用于合成蛋白质，细胞经传代培养5-6代后，细胞中所有蛋白质将被同位素氨基酸标记，将标记和未标记样本等量混合后提取蛋白质，再经过蛋白质酶切、脱盐以及分离和质谱分析，通过二级谱图对肽段进行序列测定从而鉴定蛋白质，比较质谱图中同一种蛋白的同一种肽段的面积大小对蛋白质进行定量。由于SILAC标记技术是体内标记技术，几乎不影响细胞的功能，因此该技术在蛋白质组学相关研究领域中得到了广泛的应用。
1、功能蛋白质筛选。
2、疾病标志物筛选。
3、药物作用靶点研究。
1、高通量，可同时鉴定并定量数千种蛋白质。
2、定量精确，定量线性范围宽，可降低由于样品制备不同而造成的实验差异。
3、相容性高，可以对在DMEM、DMEM-F12、1640三种培养基中培养的多种细胞进行标记。
4、标记采用体内标记技术时，标记效率可高达100%，且更接近样品真实状态。
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Q Exactive HF |
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Q Exactive HF-X |
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Orbitrap Fusion™ Tribrid™ |
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EOrbitrap Fusion™ Lumos™ Tribrid™ |
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FAIMS Orbitrap Exploris 480等 |
分析流程
1、蛋白质/肽段鉴定及定量结果。
2、差异蛋白质统计分析。
3、蛋白质Pathway通路分析及差异 蛋白的Pathway通路分析。
4、重复性分析（仅针对有重复设计的项目）。
5、多样品间表达模式聚类分析（适用于样本数≥3的项目）。
| 蛋白量：浓度>1μg/μl，蛋白质总量>100μg |
| 细胞：≥106 |
| ★ 注：具体样品需要量根据实验方案有所不同。 |
联系我们
SILAC (stable isotope labeling with amino acids in cell culture)技术即细胞培养条件下稳定同位素标记技术，是在细胞培养时，分别采用含有轻、中、重同位素型必需氨基酸的培养基进行细胞培养（常用稳定同位素氨基酸Lys和Arg）。细胞传代培养过程中，同位素氨基酸将被细胞用于合成蛋白质，细胞经传代培养5-6代后，细胞中所有蛋白质将被同位素氨基酸标记，将标记和未标记样本等量混合后提取蛋白质，再经过蛋白质酶切、脱盐以及分离和质谱分析，通过二级谱图对肽段进行序列测定从而鉴定蛋白质，比较质谱图中同一种蛋白的同一种肽段的面积大小对蛋白质进行定量。由于SILAC标记技术是体内标记技术，几乎不影响细胞的功能，因此该技术在蛋白质组学相关研究领域中得到了广泛的应用。
1、功能蛋白质筛选。
2、疾病标志物筛选。
3、药物作用靶点研究。
1、高通量，可同时鉴定并定量数千种蛋白质。
2、定量精确，定量线性范围宽，可降低由于样品制备不同而造成的实验差异。
3、相容性高，可以对在DMEM、DMEM-F12、1640三种培养基中培养的多种细胞进行标记。
4、标记采用体内标记技术时，标记效率可高达100%，且更接近样品真实状态。
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Q Exactive HF |
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Q Exactive HF-X |
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Orbitrap Fusion™ Tribrid™ |
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EOrbitrap Fusion™ Lumos™ Tribrid™ |
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FAIMS Orbitrap Exploris 480等 |
分析流程
1、蛋白质/肽段鉴定及定量结果。
2、差异蛋白质统计分析。
3、蛋白质Pathway通路分析及差异 蛋白的Pathway通路分析。
4、重复性分析（仅针对有重复设计的项目）。
5、多样品间表达模式聚类分析（适用于样本数≥3的项目）。
| 蛋白量：浓度>1μg/μl，蛋白质总量>100μg |
| 细胞：≥106 |
| ★ 注：具体样品需要量根据实验方案有所不同。 |
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