蛋白质磷酸化是通过蛋白质激酶催化，将ATP的磷酸基转移到底物蛋白质氨基酸残基（丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸）上的过程，其失调会导致个体生长发育失衡，并与几乎所有人类疾病相关，因此，磷酸化蛋白质组的系统分析对生命科学研究和人类健康具有重要意义。蛋白质组学技术平台建立了一种简单、高效的磷酸化蛋白质组学分析策略，基于氨基三乙酸铁（Fe-NTA）富集、单针进样和长梯度液质联用（LC-MS）对微量样品磷酸化蛋白质组深度表征，可实现单针进样LC-MS分析鉴定2-3万个磷酸化位点，能满足目前生命科学和健康医学对磷酸化蛋白质组研究的需求。

应用领域

1、不同实验条件下磷酸化蛋白质组变化及信号通路分析；

2、筛选特定蛋白激酶的磷酸化蛋白底物。

技术优点

1、胰酶和赖氨酸C端蛋白酶消化，能显著提高肽段和蛋白质的鉴定数目，提升磷酸化蛋白质组鉴定覆盖率；

2、Fe-NTA富集结合缓冲液配方，能特异性富集细胞和组织中95%以上的磷酸化蛋白；

3、能对微量样品的磷酸化蛋白质组进行深度表征：250 μg细胞系肽段样品，2小时完成1个样品的检测，覆盖25000以上磷酸化修饰位点（约4000 以上磷酸化蛋白）；500 μg细胞系肽段样品，2小时完成1个样品的检测，覆盖27000以上磷酸化修饰位点（约4000 以上磷酸化蛋白）。

可选仪器

QE HF、QE HF-X、Fusion、Lumos、Exploris 480，timsTOFpro2等

分析流程

蛋白提取后，样品经胰酶和赖氨酸C端蛋白酶Fasp酶切后，用Fe-NTA材料富集磷酸肽，脱盐处理，单针上样，经液相色谱-串联质谱分析，采用Spectronaut等软件对质谱数据进行分析，确定磷酸化位点和定量分析。

磷酸化蛋白组工作流程

可选数据分析

1. 磷酸蛋白质组的鉴定及定量分析；

2. 磷酸蛋白质组的GO分析及差异蛋白GO分析；

3. 磷酸蛋白质组的Pathway通路分析及差异磷酸蛋白质组的Pathway通路分析；

4. 重复性分析（仅针对有重复设计的项目）；

5. 多样品间表达模式聚类分析（适用于样本数≥3的项目）。

样品要求

蛋白提取物：≥0.5mg

细胞：≥2.5x10⁶